常见问题

1 如何储存 prepGEM?

prepGEM酶具有很好的耐热性,这意味着它在室温下保存良好。但是,为了延长使用寿命,我们建议将其保存在冰箱中,或者将其长期存放在-20°C的冰箱中。这主要是为了防止打开后溶液受到污染。

在MicroGEM,当酶从-20°C循环到+20°C,每循环一个月时,我们没有发现活性损失。然而,如果你有一个大的管子,而且你要多次使用它,最好把它分成小部分。


2 如何存储 prepGEM 提取的 DNA?

产生的DNA是稳定的,但考虑到该试剂盒将用于一系列基质,应采取一些常识性的保护措施,以便长期保存。

  • 从提取物中去除任何残留组织,并将DNA转移到新的试管中。尽管DNA分子量很大,但要注意高速离心会使DNA从溶液中脱落。
  • 储存在 -20°C .
  • 将DNA加 到 1×TE缓冲.

3 如何量化 prepGEM提取的 DNA?
由于MicroGEM试剂盒产生的热循环DNA约为90%的单链,因此使用双链特异性染料(如Picogem(Invitrogen))的荧光法会低估DNA的产量。请参阅我们的应用说明。


4 从血液中提取的DNA是粉色的,能用吗?
可以。提取缓冲液用于沉淀大部分抑制剂。仍有少量抑制作用,但如果您使用推荐量的PCR提取物(25μl反应中为1μl),将看不到抑制作用。如果出于某种原因,你需要使用更多的DNA,并且抑制成为一个问题,那么我们建议使用耐热的Taq酶。


5 用 prepGEM 提取的DNA 在跑胶时, 看起来像是杂质。
因为DNA在加热过程中变性,而且还含有RNA。因此,它不在染色琼脂糖凝胶上作为离散带运行。MicroGEM提取的DNA在基于PCR的应用中效果非常好。如果你想看看凝胶上的DNA,在提取过程中省去95°C步骤,在加载试剂中加入1μl的RNAse A。


6 其他试剂可以纯化DNA, 确定这是更好的方法吗?
是否需要纯DNA?如果您正在制作基因库、执行基因组消化或克隆,那么我们不推荐MicroGEM工具包。然而,基于PCR的应用不需要抛光DNA。将BSA添加到PCR时,花时间和金钱从DNA中去除所有蛋白质有什么意义?如果您不相信MicroGEM试剂盒正常工作,并且工作良好,请发送电子邮件给我们,我们将为您提供一个试用装。


7 能使用MicroGEM 提取的 DNA 进行基因克隆吗?
如果这个过程涉及到一个PCR(扩增子库),那么MicroGEM提取的DNA将很好地工作。如果你想要基因组DNA来准备文库,那么我们建议使用其他方法。


8 消化组织时有残留物,是否应该增加消化时间?
目的是提取足够的DNA,而不是制造肽汤。 过度消化组织样本会增加DNA产量,但也会增加抑制水平。 如果您遵循MicroGEM方法将获得足够的DNA,用于少量组织和短孵育时间的许多实验。 不要固执己见地认为必须把所有的DNA都取出来。


9 可以减少孵化时间吗?
几乎可以确定。 95°C的步骤通常可以减少到2分钟,而75°C的步骤可以减少到5分钟。 产量可能会降低,但如果您打算只进行一些PCR,那么您将获得足够的产量。 鉴于我们无法将单一方法与客户使用的许多不同类型的基材相匹配,因此对该方法进行一点优化是值得的。


10 可以使用水浴代替热循环仪来培养吗?
可以,但一定要考虑加速时间 – 管内可能需要一段时间才能达到温度。 此外,水浴容易污染您的样品,因此您需要非常小心。 建议使用热循环仪。


11 可以配置大量的混合液并存储吗?

不。稀释后的酶保存时间不要超过2-3小时。和大多数蛋白质一样,蛋白酶会缓慢地粘附在塑料管壁上,蛋白酶是非常疏水的。对于其他酶,通过向试剂中添加BSA可以降低粘附力,但当然不能使用蛋白质来稳定蛋白酶。缓冲液含有表面活性剂以减少这种影响,但由于粘附水平取决于所使用的管道类型,因此很难预测会发生什么损失……使用新鲜的主混合物以获得最佳效果。


12 提取了微量样本,当我回到他们身边时,DNA消失了。

看看关于DNA存储的常见问题解答,但另一个可能的原因是DNA粘附在管壁上。这是任何方法生产的低浓度DNA样品存储过程中的一个问题。可以购买特殊的试管来减少这种影响,你也可以在储存的样品中添加载体DNA和BSA。


13 有什么推荐的自动化系统?

开发MicroGEM提取系统的目标之一是创建一种可以在大多数现成的液体处理机器上实现自动化方法。使用我们的方法不需要昂贵的机器。


14 MicroGEM提取的DNA与基于自动化种方法相比如何?

基于珠净化方法与柱净化方法一样,一般依赖于使用朝性盐和有机溶剂,涉及多个洗涤步骤和孵育。这些方法通常会产生高产量、高纯度的DNA,但在时间、移液管尖端使用、试剂盒成本和仪器方面,它们比MicroGEM提取方法成本要高很多。

对于下游的PCR应用,这些方法产生的产量和纯度通常是不必要的。自动化纯化方法的挑战之一是化学物质携带到洗脱DNA中的发生率。虽然MicroGEM不会产生纯DNA,但进入PCR分析的携带物仅限于细胞提取物和降解蛋白质,很少对PCR产生影响。

还请记住,用柱或珠提取DNA的仪器只能做到这一点,MicroGEM允许您使用任何可以用于其他用途的液体处理机器。


15 需要纯化DNA吗?
这完全根据下游应用。对于PCR/qPCR的应用,不需要生成高纯度的DNA。PCR反应的易污染性实际上使纯化步骤呈阴性。我们的客户通常使用MicroGEM提取的DNA进行复杂的下游分析,例如40到60个PLEX PCR扩增。


16 如何获得技术支持?
技术支持邮箱:info@gemteke.com.


17 MicroGEM 提取的 DNA 可以用于定量 PCR吗?
可以, MicroGEM提取的DNA应适用于使用SYBR Green™或基于探针的方法进行qPCR分析。定量PCR也可用于准确评估样本中存在的DNA数量,例如使用Quantifier™对人类DNA进行评估。


18 从MicroGEM 提取的DNA产量有多少?
适样本情况而定。 在一般情况下,技术指南给出了信息,释放的DNA在100到1000的PCR循环是足够的。


19 MicroGEM 试剂中的缓冲液组成是什么?
缓冲液的组成是专有信息。但是每个缓冲液都经过精心的优化,以适应一般的下游应用的试剂类型,如所有的forensicGEM产品生产的DNA适用于更广泛使用的法医分析工具包(例如Identifiler)。